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iFluor 665琥珀酰亚胺酯 货号1550-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor 665琥珀酰亚胺酯

iFluor 665琥珀酰亚胺酯

货号 1550 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 ug 价格 1164
Ex (nm) 667 Em (nm) 692
分子量 1210.53 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：1550

产品名称：iFluor 665琥珀酰亚胺酯

规格：100ug

储存条件：-15℃，避光干燥

保质期：12个月

 

物理化学光谱特性

分子量：974.20

溶剂：DMSO

Ex(nm):667

Em(nm):692

Abs(nm):661

 

产品介绍

AAT Bioquest的iFluor 染料针对标记蛋白质（特别是抗体）进行了优化。这些染料是明亮的，耐光的，并且对蛋白质的淬灭作用极小。它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如350、405、488、532、555、633和647 nm）激发。 iFluor 665系列的光谱特性类似于AlexaFluor®660（AlexaFluor®是Invitrogen的商标）。 iFluor 665系列的荧光在pH值从3到11时不受pH值的影响。这些光谱特性使该新染料系列成为AlexaFluor®660的出色替代品。在相同条件下，iFluor 665在某些抗体上可提供更强的荧光信号。 iFluor 665 SE相当稳定，并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。

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参考文献

Recognition of Invasive Prostate Cancer Using a GHRL Polypeptide Probe Targeting GHSR in a Mouse Model In Vivo.
Authors: Ye, Huamao and Yang, Yue and Chen, Rui and Shi, Xiaolei and Fang, Yu and Yang, Jun and Dong, Yuanzhen and Chen, Lili and Xia, Jianghua and Wang, Chao and Yang, Chenghua and Feng, Jun and Wang, Yang and Feng, Xiang and Lü, Chen
Journal: Current pharmaceutical design (2020): 1614-1621

A rapid sensitive, flow cytometry-based method for the detection of Plasmodium vivax-infected blood cells.
Authors: Roobsoong, Wanlapa and Maher, Steven P and Rachaphaew, Nattawan and Barnes, Samantha J and Williamson, Kim C and Sattabongkot, Jetsumon and Adams, John H
Journal: Malaria journal (2014): 55

Reengineering the optical absorption cross-section of photosynthetic reaction centers.
Authors: Dutta, Palash K and Lin, Su and Loskutov, Andrey and Levenberg, Symon and Jun, Daniel and Saer, Rafael and Beatty, J Thomas and Liu, Yan and Yan, Hao and Woodbury, Neal W
Journal: Journal of the American Chemical Society (2014): 4599-604

Comparison of a chimeric anti-carcinoembryonic antigen antibody conjugated with visible or near-infrared fluorescent dyes for imaging pancreatic cancer in orthotopic nude mouse models.
Authors: Maawy, Ali A and Hiroshima, Yukihiko and Kaushal, Sharmeela and Luiken, George A and Hoffman, Robert M and Bouvet, Michael
Journal: Journal of biomedical optics (2013): 126016

Nucleic acid sandwich hybridization assay with quantum dot-induced fluorescence resonance energy transfer for pathogen detection.
Authors: Chou, Cheng-Chung and Huang, Yi-Han
Journal: Sensors (Basel, Switzerland) (2012): 16660-72

Single-molecule dynamics of phytochrome-bound fluorophores probed by fluorescence correlation spectroscopy.
Authors: Miller, Abigail E and Fischer, Amanda J and Laurence, Ted and Hollars, Christopher W and Saykally, Richard J and Lagarias, J Clark and Huser, Thomas
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (2006): 11136-41

A far-red fluorescent contrast agent to image epidermal growth factor receptor expression.
Authors: Hsu, Elizabeth R and Anslyn, Eric V and Dharmawardhane, Su and Alizadeh-Naderi, Reza and Aaron, Jesse S and Sokolov, Konstantin V and El-Naggar, Adel K and Gillenwater, Ann M and Richards-Kortum, Rebecca R
Journal: Photochemistry and photobiology (2004): 272-9

PE-iFluor 750 串联染料 货号2704-AAT Bioquest荧光染料

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PE-iFluor 750 串联染料

PE-iFluor 750 串联染料

货号 2704 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2388
Ex (nm) 566 Em (nm) 778
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：2704

产品名称：PE-iFluor 750 串联染料

规格：1mg

储存条件：2-8℃避光防潮

保质期：6个月

 

产品物理化学光谱特性

外观：固体

溶剂：水

激发波长(nm)：566

发射波长(nm)：778

 

产品介绍

PE-iFluor 750串联染料 是流式细胞术中使用的一种新颜色染料。其主要吸收峰位于 565 nm，发射峰位于 ~770 nm。它已通过光谱流式细胞仪进行了验证。 PE-iFluor 750 串联染料的染色指数比相应的 PE-Alexa Fluor 750 或 PE-Cy7 串联染料更高。 AAT Bioquest 为常规和光谱流式细胞术应用提供最多的颜色，包括 iFluor 、mFluor 有机染料及其各种串联染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PE-iFluor 750 串联染料。 

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参考文献

Fluorescent energy transfer causing misleading signal in multicolor flow cytometry.
Authors: Khenine, Hana and Waeckel, Louis and Seghrouchni, Fouad and Berger, Anne-Emmanuelle and Lambert, Claude
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2021)

The ISCCA flow protocol for the monitoring of anti-CD20 therapies in autoimmune disorders.
Authors: Gatti, Arianna and Buccisano, Francesco and Scupoli, Maria T and Brando, Bruno
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2021): 194-205

Probing Surface Membrane Receptors Using Engineered Bacteriophage Bioconjugates.
Authors: Lomakin, Yakov A and Kaminskaya, Alena N and Stepanov, Alexey V and Shmidt, Anna A and Gabibov, Alexander G and Belogurov, Alexey A
Journal: Bioconjugate chemistry (2019): 1500-1506

A ten-color tube with dried antibody reagents for the screening of hematological malignancies.
Authors: Correia, R P and Rajab, A and Bento, L C and Alexandre, A M and Vaz, A C and Schimidell, D and Pedro, E C and Perin, F S and Nozawa, S T and Barroso, R S and Bacal, N S
Journal: International journal of laboratory hematology (2018): 136-143

Initial flow cytometric evaluation of the Clearllab lymphoid screen.
Authors: Hedley, B D and Cheng, G and Luider, J and Kern, W and Lozanski, G and Chin-Yee, I and Lowes, L E and Keeney, M and Careaga, D and Magari, R and Tejidor, L
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2018): 707-713

Reduced CD4 T Lymphocytes in Lymph Nodes of the Mouse Model of Autism Induced by Valproic Acid.
Authors: Baronio, Diego and Bauer-Negrini, Guilherme and Castro, Kamila and Della-Flora Nunes, Gustavo and Riesgo, Rudimar and Mendes-da-Cruz, Daniella Arêas and Savino, Wilson and Gottfried, Carmem and Bambini-Junior, Victorio
Journal: Neuroimmunomodulation (2018): 280-284

CD4+ T cells and natural killer cells: Biomarkers for hepatic fibrosis in human immunodeficiency virus/hepatitis C virus-coinfected patients.
Authors: Laufer, Natalia and Ojeda, Diego and Polo, María Laura and Martinez, Ana and Pérez, Héctor and Turk, Gabriela and Cahn, Pedro and Zwirner, Norberto Walter and Quarleri, Jorge
Journal: World journal of hepatology (2017): 1073-1080

Comparison of Flow-cytometric Antibody Secreting Cell Assay and Mabtech Immunoglobulin ELISpot Assay.
Authors: Lee, N and In, J W and Kim, H and Roh, E Y and Shin, S and Park, K U and Yang, J and Song, E Y
Journal: Transplantation proceedings (2017): 963-966

Semiconducting polymer dots with bright narrow-band emission at 800 nm for biological applications.
Authors: Chen, Dandan and Wu, I-Che and Liu, Zhihe and Tang, Ying and Chen, Haobin and Yu, Jiangbo and Wu, Changfeng and Chiu, Daniel T
Journal: Chemical science (2017): 3390-3398

[Changes of monocyte and monocyte-platelet aggregates in different subgroups of thrombotic events in patients with acute myocardial infarction during PCI].
Authors: Wang, Sheng and Sun, Cuifang and Liao, Wang and Wu, Zhongwei and Wang, Yudai and Huang, Xiuxian and Lu, Sijia and Dong, Xiaoli and Shuai, Fujie and Li, Bin
Journal: Xi bao yu fen zi mian yi xue za zhi = Chinese journal of cellular and molecular immunology (2017): 959-965

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯 货号71650-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯 货号71650 货号 71650 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 586 Em (nm) 601
分子量 1436.72 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 594 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 594。iFluor Ultra 594 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 594 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 594 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 594 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 594 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 594（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 594 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 594 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 594 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 594 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 594 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 594 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 594 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71680-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71680 货号 71680 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 749 Em (nm) 773
分子量 1426.78 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71681-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71681 货号 71681 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 ug 价格 1164
Ex (nm) 749 Em (nm) 773
分子量 1426.78 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71682-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯 货号71682 货号 71682 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 11628
Ex (nm) 749 Em (nm) 773
分子量 1426.78 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

APC-iFluor 750 串联染料 货号2626-AAT Bioquest荧光染料

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APC-iFluor 750 串联染料

APC-iFluor 750 串联染料

货号 2626 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2388
Ex (nm) 754 Em (nm) 776
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：2626

产品名称：APC-iFluor 750 串联染料

规格：1mg

储存条件：2-8℃避光防潮

保质期：6个月

 

产品物理化学光谱特性

外观：固体

溶剂：水

 

产品介绍

串联染料是一类独特的荧光分子，由两种不同的共价连接荧光团、供体（例如 PE 或 APC）和发射较长波长的荧光受体（例如 Texas Red、Cy5、Cy7、iFluor 594 或 iFluor 750组成）。APC-iFluor 750 串联染料是常用 APC-Cy7 的绝佳替代品，具有更高的 FRET 效率和信号。其主要吸收峰位于 651 nm，发射峰位于 ~780 nm。 金畔还提供其预活化的 APC-iFluor 750 串联染料，以促进 APC-iFluor 750 串联与抗体和其他蛋白质（如链霉亲和素和其他二级试剂）的串联。我们的预活化 APC-iFluor 750 可随时进行缀合，其产量比传统繁琐的SMCC 的化学方法高得多。此外，我们的预活化 APC-iFluor 750 串联染料通过蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而 SMCC 化学靶向必须通过抗体还原再生的硫醇基团。

 

参考文献

CD4+ T cells and natural killer cells: Biomarkers for hepatic fibrosis in human immunodeficiency virus/hepatitis C virus-coinfected patients.
Authors: Laufer, Natalia and Ojeda, Diego and Polo, María Laura and Martinez, Ana and Pérez, Héctor and Turk, Gabriela and Cahn, Pedro and Zwirner, Norberto Walter and Quarleri, Jorge
Journal: World journal of hepatology (2017): 1073-1080

Quantification of mitochondrial reactive oxygen species in living cells by using multi-laser polychromatic flow cytometry.
Authors: De Biasi, Sara and Gibellini, Lara and Bianchini, Elena and Nasi, Milena and Pinti, Marcello and Salvioli, Stefano and Cossarizza, Andrea
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2016): 1106-1110

Analysis of Populations of Memory T-Helper Cells Expressing CXCR3 and CCR6 Chemokine Receptors in Peripheral Blood of Patients with Chronic Viral Hepatitis C.
Authors: Elezov, D S and Kudryavtsev, I V and Arsent’ev, N A and Basin, V V and Esaulenko, E V and Semenov, A V and Totolyan, A A
Journal: Bulletin of experimental biology and medicine (2015): 238-42

Presence of CD34(+)CD38(-)CD58(-) leukemia-propagating cells at diagnosis identifies patients at high risk of relapse with Ph chromosome-positive ALL after allo-hematopoietic SCT.
Authors: Kong, Y and Xu, L-P and Liu, Y-R and Qin, Y-Z and Sun, Y-Q and Wang, Y and Jiang, H and Jiang, Q and Chen, H and Chang, Y-J and Huang, X-J
Journal: Bone marrow transplantation (2015): 348-53

A flow cytometric method for the analysis of macrophages in the vascular wall.
Authors: Moore, Jeffrey P and Sakkal, Samy and Bullen, Michelle L and Kemp-Harper, Barbara K and Ricardo, Sharon D and Sobey, Christopher G and Drummond, Grant R
Journal: Journal of immunological methods (2013): 33-43

Combined normal donor and CLL: Single tube ZAP-70 analysis.
Authors: Degheidy, Heba A and Venzon, David J and Farooqui, Mohammed Z H and Abbasi, Fatima and Arthur, Diane C and Wilson, Wyndham H and Wiestner, Adrian and Stetler-Stevenson, M A and Marti, Gerald E
Journal: Cytometry. Part B, Clinical cytometry (2012): 67-77

The role of CD19 and CD27 in the diagnosis of multiple myeloma by flow cytometry: a new statistical model.
Authors: Cannizzo, Elisa and Carulli, Giovanni and Del Vecchio, Luigi and Ottaviano, Virginia and Bellio, Emanuele and Zenari, Ezio and Azzarà, Antonio and Petrini, Mario and Preffer, Frederic
Journal: American journal of clinical pathology (2012): 377-86

Measurement conditions for flow cytometry analyses of cell lines from urological carcinomas.
Authors: Tölle, Angelika and Abdallah, Ziyad and Jung, Klaus and Bäumler, Hans
Journal: Journal of fluorescence (2010): 779-86

An optimized flow cytometry protocol for analysis of angiogenic monocytes and endothelial progenitor cells in peripheral blood.
Authors: Hristov, Mihail and Schmitz, Susanne and Schuhmann, Christoph and Leyendecker, Thorsten and von Hundelshausen, Philipp and Krötz, Florian and Sohn, Hae-Young and Nauwelaers, Frans A and Weber, Christian
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2009): 848-53

Flow cytometry APC-tandem dyes are degraded through a cell-dependent mechanism.
Authors: Le Roy, Christine and Varin-Blank, Nadine and Ajchenbaum-Cymbalista, Florence and Letestu, Rémi
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2009): 882-90

iFluor 597 琥珀酰亚胺酯 货号1050-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor 597 琥珀酰亚胺酯

iFluor 597 琥珀酰亚胺酯

货号 1050 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 598 Em (nm) 618
分子量 1058.29 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

iFluor 597琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。与常规的染料(如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7)相比，iFluor 染料具有更好的标记性能。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。特定标记反应可能需要升高或降低的温度。iFluor系列染料是AF系列染料的完美替代品。

 

iFluor 597 琥珀酰亚胺酯 货号1050

  • AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
  • 锦囊：iFluor 系列染料大集合

产品说明书

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

 

参考文献

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