钙离子荧光探针Fluo-8H, AM 货号21091-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-8H, AM

货号	21091	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	10×50 ug	价格	2604
Ex (nm)	495	Em (nm)	516
分子量	1074.98	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Fluo-8H, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca²⁺后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca²⁺浓度的变化。Fluo-3和Fluo-4最常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件以最大化其细胞钙响应。Fluo-8®染料的开发是为了改善细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，最大激发波长为~490 nm，最大发射波长为~520 nm。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供一系列具有不同钙结合亲和力的优异Fluo-8®试剂（Fluo-8®：Kd = 389 nM; Fluo-8H：Kd = 232 nM; Fluo-8L：Kd =1.86μM; Fluo-8FF ：Kd =10μM）。我们还提供多种包装尺寸，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

适用仪器

荧光显微镜
激发：	FITC
发射：	FITC
推荐孔板：	黑色透明

荧光酶标仪
激发：	490nm
发射：	525nm
cutoff:	515nm
推荐孔板：	黑色透明
读取模式：	底读模式

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fluo-8H，AM原液。
2.1使用的Fluo-8H，AM的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fluo-8H TM，AM与465.12μL无水DMSO混合。

3.使用10μMFluo-8H ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Fluo-8H ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFluo-8H TM，AM，25.6μL10％Pluronic F-127和256μL25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Fluo-8H™的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMFluo-8H ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 494/517 nm运行实验。

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: Nature communications (2019): 1–18

Cryo-EM Studies of TMEM16F Calcium-Activated Ion Channel Suggest Features Important for Lipid Scrambling
Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567–579

Discrimination of Dormant and Active Hematopoietic Stem Cells by G0 Marker Reveals Dormancy Regulation by Cytoplasmic Calcium
Authors: Fukushima, Tsuyoshi and Tanaka, Yosuke and Hamey, Fiona K and Chang, Chih-Hsiang and Oki, Toshihiko and Asada, Shuhei and Hayashi, Yasutaka and Fujino, Takeshi and Yonezawa, Taishi and Takeda, Reina and others
Journal: Cell Reports (2019): 4144–4158

Ketamine Increases Proliferation of Human iPSC-Derived Neuronal Progenitor Cells via Insulin-Like Growth Factor 2 and Independent of the NMDA Receptor
Authors: Grossert, Aless and ra and Mehrjardi, Narges Zare and Bailey, Sarah J and Lindsay, Mark A and Hescheler, Jürgen and Saric, Tomo and Teusch, Nicole
Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
Authors: Yu, Huasheng and Zhao, Tianjun and Liu, Simin and Wu, Qinxue and Johnson, Omar and Wu, Zhaofa and Zhuang, Zihao and Shi, Yaocheng and Peng, Luxin and He, Renxi and others
Journal: eLife (2019): e48431

P2Y6 signaling in alveolar macrophages prevents leukotriene-dependent type 2 allergic lung inflammation
Authors: Nagai, Jun and Balestrieri, Barbara and Fanning, Laura B and Kyin, Timothy and Cirka, Haley and Lin, Junrui and Idzko, Marco and Zech, Andreas and Kim, Edy Y and Brennan, Patrick J and others
Journal: The Journal of clinical investigation (2019)

Hyperglycaemia disrupts conducted vasodilation in the resistance vasculature of db/db mice
Authors: Lemmey, Hamish AL and Ye, Xi and Ding, Hong C and Triggle, Christopher R and Garland, Christopher J and Dora, Kim A
Journal: Vascular pharmacology (2018): 29–35

Methionine and valine activate the mammalian target of rapamycin complex 1 pathway through heterodimeric amino acid taste receptor (TAS1R1/TAS1R3) and intracellular Ca2+ in bovine mammary epithelial cells
Authors: Zhou, Y and Zhou, Z and Peng, J and Loor, Juan J
Journal: Journal of dairy science (2018): 11354–11363

TRPA1-dependent reversible opening of tight junction by natural compounds with an $alpha$, $beta$-unsaturated moiety and capsaicin
Authors: Kanda, Yusuke and Yamasaki, Youhei and Sasaki-Yamaguchi, Yoshie and Ida-Koga, Noriko and Kamisuki, Shinji and Sugawara, Fumio and Nagumo, Yoko and Usui, Takeo
Journal: Scientific reports (2018): 1–13

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: Menegon, A and Pitassi, S and Mazzocchi, N and Redaelli, L and Rizzetto, R and Roll and JF and Poli, C and Imberti, M and Lanati, A and Grohovaz, F
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Gong, Xiaoyuan and Xie, Wenbin and Wang, Bin and Gu, Lingchuan and Wang, Fuyou and Ren, Xiang and Chen, Cheng and Yang, Liu
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Ishii, Masaaki and Rohrer, Bärbel
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

High-throughput screen detects calcium signaling dysfunction in typical sporadic autism spectrum disorder
Authors: Schmunk, Galina and Nguyen, Rachel L and Ferguson, David L and Kumar, Kenny and Parker, Ian and Gargus, J Jay
Journal: Scientific Reports (2017): 40740

参考文献

Passive and parallel microfluidic formation of droplet interface bilayers (DIBs) for measurement of leakage of small molecules through artificial phospholipid membranes
Authors: Magdalena A Czekalska, Tomasz S Kaminski, Karol Makuch, Piotr Garstecki
Journal: Sensors and Actuators B: Chemical (2019)

Development of micro mechanical device having two-dimensional array of micro chambers for cell stretching
Authors: K Minami, T Hayashi, K Sato, T Nakahara
Journal: Biomedical microdevices (2018): 10

Spatiotemporal magnetic fields enhance cytosolic Ca 2+ levels and induce actin polymerization via activation of voltage-gated sodium channels in skeletal muscle cells
Authors: Mónica Rubio Ayala, Tatiana Syrovets, Susanne Hafner, Vitalii Zablotskii, Alexandr Dejneka, Thomas Simmet
Journal: Biomaterials (2018)

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1–10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775–786

Bystander effects elicited by single-cell photo-oxidative blue-light stimulation in retinal pigment epithelium cell networks
Authors: Masaaki Ishii, Bärbel Rohrer
Journal: Cell Death Discovery (2017): 16071

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

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产品名称	货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM	Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM	Cat#21080
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说明书

钙离子荧光探针Fluo-8H, AM.pdf

钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐货号21095-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐

货号	21095	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	10×50 ug	价格	2604
Ex (nm)	495	Em (nm)	516
分子量	802.60	溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca²⁺后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca²⁺浓度的变化。Fluo-3和Fluo-4最常用于可见光可兴奋的钙指示剂中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件以最大化其细胞钙响应。Fluo-8®染料的开发是为了改善细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，最大激发波长为~490 nm，最大发射波长为~520 nm。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供一系列具有不同钙结合亲和力的优异Fluo-8®试剂（Fluo-8®：Kd = 389 nM; Fluo-8H：Kd = 232 nM; Fluo-8L：Kd =1.86μM; Fluo-8FF ：Kd =10μM）。我们还提供多种包装尺寸，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Fluo-8®AM酯类

1.使用Fluo-8®AM酯：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将Fluo-8®AM酯加入活细胞的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Fluo-8®AM酯原液。

b）在实验当天，将Fluo-8® 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或0.02％Pluronic®F-127的缓冲液中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用浓度范围为4-5 uM的Fluo-8®试剂。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小染料浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Fluo-8®AM 酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的渗漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）在细胞培养箱中孵育或染料装载板室温下为20分钟至一小时。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）运行用Ex / Em比值=490/525纳米

使用Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒进行HTS应用

可以通过直接测量受体介导的cAMP积累或细胞内Ca²⁺浓度的变化来检测GPCR活化。通过Gq偶联的GPCR靶标产生细胞内Ca²⁺的增加可以使用Fluo-8®试剂和荧光酶标仪的组合进行测量。荧光成像板读取器（例如，FLIPR，FDSS或BMG NovoStar）具有冷却的CCD相机成像系统，其同时收集来自微孔板（96孔和384孔）的每个孔的信号。这些读板器可以以亚秒的间隔读取，这使得能够捕获响应的动力学，并且具有可以被编程用于连续液体添加的集成移液器。除了对GPCR靶标的强大应用外，我们的Screen Quest Fluo-8钙测定试剂盒还可用于表征钙离子通道和筛选钙离子通道靶向化合物。

钙离子荧光探针Fluo-8H, 钠盐货号21095

图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW测定试剂盒和Fluo-4 NW测定试剂盒在HEK-293细胞中测量卡巴胆碱剂量反应。将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。除去生长培养基，并将细胞分别与100μL的Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒和Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）在室温下温育1小时。通过NOVOstar（BMG LabTech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到最终指示的浓度。Fluo-8 NW 的EC ₅₀约为1.2 uM。

与基于Fluo-3或Fluo-4的其他商业钙测定试剂盒相比，我们的Screen Quest 钙测定试剂盒具有以下HTS应用优势：

广泛的应用：与GPCR和钙通道目标一起使用。
方便的光谱波长：最大激发波长@ 490 nm; 最大发射@ ~514 nm。
灵活的染料加载：室温下的染料加载（而不是Fluo-4 AM所需的37ºC）。
无需清洗，无淬火干扰您的目标。
强大的性能：使用Fluo-4 AM或Fluo-3 AM无法进行钙分析。
最强信号强度：比Fluo-4 AM亮2倍;比Fluo-3 AM亮4倍。

使用Fluo-8® 盐

钙校准可以通过测量具有精确已知的游离Ca ²⁺浓度的溶液中的指示剂的盐形式（荧光酶标仪中25至50μM）的荧光强度来进行。可以基于30mM MOPS EGTA Ca ²⁺缓冲液使用校准溶液。通常，水含有微量的钙离子。强烈建议使用30 mM MOPS + 100 mM KCl，pH 7.2作为缓冲系统。可以简单地制备如下所列的0和39μM钙原液，这两种溶液用于制备不同Ca ²⁺浓度的连续溶液

A.0μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA

B.39μM钙：30mM MOPS + 100mM KCl，pH 7.2缓冲液+ 10mM EGTA + 10mM CaCl ₂

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的K _d，使用以下等式：

的[Ca] _游离 = K _d [F─˚F _分钟 ] / F _最大 ─F]

其中F是特定实验钙水平下指示剂的荧光强度，F _min是不存在钙时的荧光强度，F _max是钙饱和探针的荧光强度。

解离常数（K _d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的钙结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的K _d值。通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca ²⁺缓冲液来进行原位校准。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或Triton®X-100可用于将指示剂暴露于受控Ca.²⁺水平的细胞外培养基。

试剂应用文献

参考文献

Cells smell on a CMOS: A portable odorant detection system using cell-laden collagen pillars
Authors: Yusuke Hirata, Yuya Morimoto, Eunryel Nam, Shotaro Yoshida, Shoji Takeuchi
Journal: (2017): 13–16

Ex vivo replication of phenotypic functions of osteocytes through biomimetic 3D bone tissue construction
Authors: Qiaoling Sun, Saba Choudhary, Ciaran Mannion, Yair Kissin, Jenny Zilberberg, Woo Y Lee
Journal: Bone (2017)

High Glucose Enhances Isoflurane-Induced Neurotoxicity by Regulating TRPC-Dependent Calcium Influx
Authors: ZhongJie Liu, ChangQing Ma, Wei Zhao, QingGuo Zhang, Rui Xu, HongFei Zhang, HongYi Lei, ShiYuan Xu
Journal: Neurochemical Research (2017): 1–14

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钙离子荧光探针Cal-520 , AM	Cat#21130
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钙离子荧光探针Fluo-8L, AM 货号21096-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Fluo-8L, AM

货号	21096	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mg	价格	3924
Ex (nm)	495	Em (nm)	516
分子量	1078.95	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21096

产品名称：钙离子荧光探针Fluo-8L, AM

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1078.95

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：494

发射波长(nm)：517

适用仪器

荧光显微镜
激发：	FITC
发射：	FITC
推荐孔板：	黑色透明

荧光酶标仪
激发：	490nm
发射：	525nm
cutoff:	515nm
推荐孔板：	黑色透明
读取模式：	底读模式

产品介绍

钙离子荧光探针Fluo-8L, AM 是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4最常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套我们的出色Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。我们还提供多种包装尺寸以满足您的特殊需求，例如1毫克；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。Kd = 232 nM；Fluo-8L：Kd = 1.86 µM；Fluo-8FF：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Fluo-8L, AM 。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

试剂应用文献

参考文献

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钙离子荧光探针Cal-520 , AM	Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM	Cat#21080
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Portelite 荧光蛋白定量试剂盒优化用于 CytoCite 和Qubit 荧光分析仪货号11109-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒优化用于 CytoCite 和Qubit 荧光分析仪

货号	11109	存储条件	在2-8度冷藏保存
规格	100 Tests	价格	1008
Ex (nm)	485	Em (nm)	590
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要组成部分。 Biuret，Lowry，BCA和Bradford检测常规用于估计蛋白质浓度。然而，这些比色测定不太敏感，并且需要大的样品体积以确保准确性。我们的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测定法（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定法）更敏感。试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中是非荧光的，但与蛋白质反应迅速并产生明亮的荧光。 Portelite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种简单的方法来定量溶液中的蛋白质浓度。该测定的动态范围为12.5ug / mL至5mg / mL的BSA。该套件针对Cytocite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化。它可用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测定柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率; （4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒。

适用仪器

Qubit 荧光计
激发：	480nm
发射：	510-580nm
器材：	0.2 mL薄壁PCR管

CytoCite 荧光计
激发：	480nm
发射：	510-580nm
器材：	0.2 mL薄壁PCR管

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备并添加BSA标准品或测试样品（10μL）
在0.2 mL PCR管（Cat＃CCT100）中制备并添加Prolite 橙色工作溶液（190μL）
在室温下孵育15分钟
使用CytoCite 或Qubit荧光分析仪监测荧光

溶液制备

Prolite 橙色工作溶液：
将5μLProlite Orange（200X）（组分A）加入995μL样品稀释缓冲液（组分E）中并充分混合。注意：请勿将工作溶液混入玻璃容器中。

样品实验方案

该方案适用于Qubit®荧光分析仪。

1.运行蛋白质测定

1.1每孔加入190μL/孔的Prolite Orange工作溶液。

1.2将10μLBSA标准品（组分B，C，D）或10μL样品加入190μLProlite Orange工作溶液管中，使最终测定体积为200μL/管。

1.3在室温下孵育反应15分钟。注意：保护样品避光，避免将样品拿在手中。

1.4将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。按照适用于CytoCite 荧光计的步骤进行操作。具体操作点击查看。

2.Qubit®荧光计的简要方案

2.1按Qubit®主屏幕主屏幕上的蛋白质，然后按读取标准。

2.2将3个含有标准的试管中的每一个插入样品室。

2.3关闭盖子并按Read标准。

2.4仪器显示结果并生成校准曲线。

2.5按Run sample并选择样品量至10μL。

2.6将样品管插入样品室。

2.7盖上盖子，然后按Read tube。

2.8仪器在实验屏幕上显示结果。最高值是原始样品浓度，最低值是稀释浓度。

3.标准溶液制备

对于CytoCite 荧光计测定，您可以选择使用自己的蛋白质标准进行校准。这是一个生成定制蛋白质标准曲线的简要方案。

3.1在PBS缓冲液中制备400μg/ ml（400 ng /μL）的蛋白质溶液。

3.2用PBS缓冲液进行1：2连续稀释，得到200,100,50,25,12.5ng /μl系列标准稀释液。

3.3将190μLPolite 橙色工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

3.4每管加入10μL标准品或10μL样品。

3.5在室温下孵育反应15分钟。

3.6将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

图示

图1使用Portelite 荧光蛋白定量试剂盒*优化用于CytoCite 和Qubit 荧光分析仪*和Qubit®荧光分析仪，在Ex / Em 485 / 5000nm下测量BSA，鸡蛋卵清蛋白，猪甲状腺球蛋白的系列稀释液。可以检测到低至50 ng / mL的蛋白质。

参考文献

Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2017): 37606-37614

Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954

Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87

Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7

Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
Journal: Analyst (2015): 3375-83

Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40

Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81

Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516

Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9

A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504

说明书

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒优化用于 CytoCite 和Qubit 荧光分析仪.pdf

D-荧光素醋酸货号12516-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

D-荧光素醋酸

货号	12516	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mg	价格	2604
Ex (nm)	328	Em (nm)	533
分子量	322.36	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：12516

产品名称：D-荧光素醋酸

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：322.36

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：328

发射波长(nm)：533

产品介绍

D-荧光素醋酸是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，D-荧光素乙酯含有在羧基位置连接的甲基部分，因此防止它被萤火虫荧光素酶识别。然而，酯通过脂肪酶活性有效地水解，并且所得的D-荧光素被荧光素酶很好地识别。 D-荧光素甲酯是用于在均相测定中或在与荧光素酶及其辅因子组合的细胞裂解物样品中化学发光测量脂肪酶活性的敏感底物。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的D-荧光素醋酸。

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

参考文献

C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li-Li Li, He-Rong Wang, Zhi-Yi Zhou, Jing Luo, Xiao-Li Wang, Xiang-Qian Xiao, Yu-Bai Zhou, Yi Zeng
Journal: PloS one (2016): e0149748

Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Martin Pichler, Verena Stiegelbauer, Petra Vychytilova-Faltejskova, Cristina Ivan, Hui Ling, Elke Winter, Xinna Zhang, Matthew Goblirsch, Annika Wulf-Goldenberg, Masahisa Ohtsuka
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres–0497

Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Tetsuya Ishimoto, Kenji Azechi, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969–1974

Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Hiroki Mano, Tetsuya Ishimoto, Takuya Okada, Naoki Toyooka, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689–1693

说明书

D-荧光素醋酸.pdf

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒货号12518-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

货号	12518	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 plate	价格	1944
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。最好的多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性，可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下，萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下，我们的试剂/试剂盒会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分，并且经过优化处理，我们还提供可以用于HTS（高通量筛选）实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度，可以用于对灵敏度有要求的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

适用仪器

发光酶标仪
推荐孔板：	白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

溶液制备

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用检测化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.1使用不含萤光素酶的样品（作为对照）来检测背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。注意：通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

参考文献

LncRNA TUBA4B functions as a competitive endogenous RNA to inhibit gastric cancer progression by elevating PTEN via sponging miR-214 and miR-216a/b
Authors: Jianbo Guo, Yan Li, He Duan, Lu Yuan
Journal: Cancer Cell International (2019): 156

Identification of compounds that modulate retinol signaling using a cell-based qHTS assay
Authors: Yanling Chen, Srilatha Sakamuru, Ruili Huang, David H Reese, Menghang Xia
Journal: Toxicology in Vitro (2016): 287–296

Microwave ablation-assisted liver gene transfection in rats
Authors: Ruoyu Jiang, Lingkai Meng, Longhao Sun, Xianghui He, Xiaoyu Liang, Jie Zhang, Zhixiang Zhang
Journal: International Journal of Hyperthermia (2016): 666–672

Activation of relaxin family receptor 1 from different mammalian species by relaxin peptide and small-molecule agonist ML290
Authors: Zaohua Huang, Courtney Myhr, Ross AD Bathgate, Brian A Ho, Amaya Bueno, Xin Hu, Jingbo Xiao, Noel Southall, Elena Barnaeva, Irina U Agoulnik
Journal: Frontiers in endocrinology (2015)

Neuroprotective effect of schizandrin A on oxygen and glucose deprivation/reperfusion-induced cell injury in primary culture of rat cortical neurons
Authors: Cai-Ping Wang, Gui-Cai Li, Yun-Wei Shi, Xiao-Chuan Zhang, Jian-Long Li, Zhi-Wei Wang, Fei Ding, Xin-Miao Liang
Journal: Journal of physiology and biochemistry (2014): 735–747

Discovery of ML367, inhibitor of ATAD5 stabilization
Authors: Jason M Rohde, Ganesha Rai, Yong Jun Choi, Srilatha Sakamuru, Jennifer T Fox, Ruili Huang, Menghang Xia, Kyungjae Myung, Matthew B Boxer, David J Maloney
Journal: (2013)

说明书

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒.pdf

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒货号12519-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

货号	12519	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	10 plates	价格	5244
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

适用仪器

发光酶标仪
推荐孔板：	白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

溶液制备

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

参考文献

说明书

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒.pdf

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒货号12520-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

货号	12520	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 plates	价格	39060
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

适用仪器

发光酶标仪
推荐孔板：	白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

溶液制备

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

参考文献

说明书

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒.pdf

Cell Meter 活细胞Caspase 13结合检测试剂盒绿色荧光货号20125-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 活细胞Caspase 13结合检测试剂盒绿色荧光

货号	20125	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	25 Tests	价格	3924
Ex (nm)	493	Em (nm)	517
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。一旦进入细胞，胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。此Cell Meter 活细胞caspase 13活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 13活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 13活性，或用于筛选caspase 13抑制剂。 FAM-LEED-FMK，绿色标记试剂，可通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的胱天蛋白酶13。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。

点击查看光谱

适用仪器

流式细胞仪
激发：	见表1
发射：	见表1

荧光显微镜
激发：	见表1
发射：	见表1
推荐孔板：	黑色透明

荧光酶标仪
激发：	见表1
发射：	见表1
通道：	黑色透明
读取模式：	底读模式

表1:参数信息

	FAM-LEED-FMK	碘化丙啶	hoechst 染料
流式细胞仪	530/30 nm激光 (FITC 通道)	610/20 nm激光(PE-Texas Red 通道)	450/40 nm激光 (Pacific Blue 通道)
荧光显微镜	FITC 通道	TRITC 通道	DAPI 通道
荧光酶标仪	490/525nm	535/635nm	350/461nm

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×10⁵到2×10⁶个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注：使用前将所有部件在室温下解冻。

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 10⁶个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：

1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1小时。

注1：对于FAM-YVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1：FAM-YVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤6。

5.如果需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。

6.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461纳米）。

6.1对于流式细胞仪，使用FL1通道监测荧光强度（FL2通道用于碘化丙锭染色）。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞（用于碘化丙啶染色的TRITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）。

6.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

相关产品

产品名称	货号
Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒绿色荧光	Cat#20108
Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒绿色荧光	Cat#20115
Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒绿色荧光	Cat#20117

说明书

Cell Meter 活细胞Caspase 13结合检测试剂盒绿色荧光.pdf

氯离子荧光探针lucigenin CAS 22103-92-0 货号21259-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

氯离子荧光探针lucigenin CAS 22103-92-0

货号	21259	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	10 mg	价格	1008
Ex (nm)	369	Em (nm)	503
分子量	510.5	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21259

产品名称：氯离子荧光探针lucigenin

CAS：22103-92-0

规格：10mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：510.5

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：455

发射波长（nm）：505

产品介绍

氯离子荧光探针lucigenin是美国AAT Bioquest生产的用于检测氯离子的荧光探针。氯化物指示剂，其荧光依赖于氯离子浓度。它的荧光通过碰撞淬灭被氯化物淬灭。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的氯离子荧光探针lucigenin。

点击查看光谱

参考文献

Flow injection chemiluminescence determination of isoniazid using the lucigenin-periodate system
Authors: Du J, Lu J.
Journal: Luminescence (2006): 26

Identification of cytochrome-b5 reductase as the enzyme responsible for NADH-dependent lucigenin chemiluminescence in human spermatozoa
Authors: Baker MA, Krutskikh A, Curry BJ, Hetherington L, Aitken RJ.
Journal: Biol Reprod (2005): 334

Chemiluminescence of lucigenin is dependent on experimental conditions
Authors: Hyrsl P, Lojek A, Ciz M, Kubala L.
Journal: Luminescence (2004): 61

Electrogenerated chemiluminescence reaction of lucigenin with isatin at a platinum electrode
Authors: Qi H, Zhang C.
Journal: Luminescence (2004): 21

Identification of cytochrome P450-reductase as the enzyme responsible for NADPH-dependent lucigenin and tetrazolium salt reduction in rat epididymal sperm preparations
Authors: Baker MA, Krutskikh A, Curry BJ, McLaughlin EA, Aitken RJ.
Journal: Biol Reprod (2004): 307

Lucigenin and coelenterazine as superoxide probes in mitochondrial and bacterial membranes
Authors: Kervinen M, Patsi J, Finel M, Hassinen IE.
Journal: Anal Biochem (2004): 45

Luminol-, isoluminol- and lucigenin-enhanced chemiluminescence of rat blood phagocytes stimulated with different activators
Authors: Pavelkova M, Kubala L.
Journal: Luminescence (2004): 37

[Chemiluminescent assay for biological substances–chemiluminescent assay for alkaline phosphatase using lucigenin and its application to enzyme immunoassay]
Authors: Maeda M.
Journal: Rinsho Byori (2004): 851

Chemiluminescence of lucigenin by electrogenerated superoxide ions in aqueous solutions
Authors: Okajima T, Ohsaka T.
Journal: Luminescence (2003): 49

Effect of the isocoumarin paepalantine on the luminol and lucigenin amplified chemiluminescence of rat neutrophils
Authors: Kitagawa RR, Raddi MS, Khalil NM, Vilegas W, da Fonseca LM.
Journal: Biol Pharm Bull (2003): 905

说明书

氯离子荧光探针lucigenin CAS 22103-92-0.pdf

BC琥珀酰亚胺酯货号12565-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月27日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

BC琥珀酰亚胺酯

货号	12565	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mg	价格	2472
Ex (nm)		Em (nm)
分子量	441.44	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：12564

产品名称：BC琥珀酰亚胺酯

规格：1 mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

外观：固体

溶剂：DMSO

产品介绍

CLIP标签是SNAP标签的修改版。它也是衍生自人O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶的自标记蛋白。代替苄基鸟嘌呤衍生物，将CLIP标签修改为与苄基胞嘧啶衍生物反应。它可用作标记您感兴趣的蛋白质（POI）的蛋白质标签。BC Succinimidyl Ester是一种胺反应性结构单元，用于从含胺标记或生物靶标制备SNAP底物。BC Succinimidyl Ester构建基块为各种CLIP标签底物的开发提供了便利，这些标签用于标记CLIP标签融合蛋白，可用于多种生物学应用。

参考文献

Analysis of the nucleocytoplasmic shuttling RNA-binding protein HNRNPU using optimized HITS-CLIP method.
Authors: Yugami, Masato and Okano, Hideyuki and Nakanishi, Atsushi and Yano, Masato
Journal: PloS one (2020): e0231450

Expanding the substrate selectivity of SNAP/CLIP-tagging of intracellular targets.
Authors: Macias-Contreras, Miguel and Little, Kevin N and Zhu, Lei
Journal: Methods in enzymology (2020): 233-257

Modulation of emission and singlet oxygen photosensitisation in live cells utilising bioorthogonal phosphorogenic probes and protein tag technology.
Authors: Leung, Peter Kam-Keung and Lo, Kenneth Kam-Wing
Journal: Chemical communications (Cambridge, England) (2020): 6074-6077

Visualization of Spirochetes by Labeling Membrane Proteins With Fluorescent Biarsenical Dyes.
Authors: Hillman, Chadwick and Stewart, Philip E and Strnad, Martin and Stone, Hunter and Starr, Tregei and Carmody, Aaron and Evans, Tyler J and Carracoi, Valentina and Wachter, Jenny and Rosa, Patricia A
Journal: Frontiers in cellular and infection microbiology (2019): 287

Quantifying transcription factor binding dynamics at the single-molecule level in live cells.
Authors: Presman, Diego M and Ball, David A and Paakinaho, Ville and Grimm, Jonathan B and Lavis, Luke D and Karpova, Tatiana S and Hager, Gordon L
Journal: Methods (San Diego, Calif.) (2017): 76-88

Rational Design and Applications of Semisynthetic Modular Biosensors: SNIFITs and LUCIDs.
Authors: Farrants, Helen and Hiblot, Julien and Griss, Rudolf and Johnsson, Kai
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 101-117

Specifically and wash-free labeling of SNAP-tag fused proteins with a hybrid sensor to monitor local micro-viscosity.
Authors: Wang, Chao and Song, Xinbo and Chen, Lingcheng and Xiao, Yi
Journal: Biosensors & bioelectronics (2017): 313-320

A Fluorescent Reporter for Single Cell Analysis of Gene Expression in Clostridium difficile.
Authors: Cassona, Carolina Piçarra and Pereira, Fátima and Serrano, Mónica and Henriques, Adriano O
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2016): 69-90

A Monoclonal Antibody That Discriminates Between SNAP-Tagged and CLIP-Tagged Proteins.
Authors: Bialon, Magdalena and Grezella, Clara and Friesen, Ludmila and Sieben, Thorsten and Pham, Anh-Tuan and Fischer, Rainer and Barth, Stefan and Püttmann, Christiane and Stein, Christoph
Journal: Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy (2016): 141-7

Development of a Split SNAP-CLIP Double Labeling System for Tracking Proteins Following Dissociation from Protein-Protein Complexes in Living Cells.
Authors: Mie, Masayasu and Naoki, Tatsuhiko and Kobatake, Eiry
Journal: Analytical chemistry (2016): 8166-71

说明书

BC琥珀酰亚胺酯.pdf

BC马来酰亚胺货号12567-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月26日由Harlan Teklad中国

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BC马来酰亚胺

货号	12567	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mg	价格	2472
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：12567

产品名称：BC马来酰亚胺

规格：1 mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

外观：固体

溶剂：DMSO

产品介绍

CLIP标签是SNAP标签的修改版。它也是衍生自人O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶的自标记蛋白。代替苄基鸟嘌呤衍生物，将CLIP标签修改为与苄基胞嘧啶衍生物反应。它可用作标记您感兴趣的蛋白质（POI）的蛋白质标签。BC马来酰亚胺是一种硫醇反应性的构建块，用于从含硫醇的标记物或生物靶标制备SNAP底物。BC Maleimide构建块为各种CLIP标签底物的开发提供了便利，这些标签用于标记CLIP标签融合蛋白，可用于多种生物学应用。

参考文献

Dynamic internalization and recycling of a metal ion transporter: Cu homeostasis and CTR1, the human Cu⁺ uptake system.
Authors: Clifford, Rebecca J and Maryon, Edward B and Kaplan, Jack H
Journal: Journal of cell science (2016): 1711-21

mCarts: Genome-Wide Prediction of Clustered Sequence Motifs as Binding Sites for RNA-Binding Proteins.
Authors: Weyn-Vanhentenryck, Sebastien M and Zhang, Chaolin
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2016): 215-26

Capturing Cell-Cell Interactions via SNAP-tag and CLIP-tag Technology.
Authors: Hoehnel, S and Lutolf, M P
Journal: Bioconjugate chemistry (2015): 1678-86

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TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低ROX 货号17272-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

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TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低ROX

货号	17272	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mL	价格	1164
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17272

产品名称：TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*

规格：1ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 是一种即用型 2X溶液，针对 qPCR 和 2 步 RT-qPCR 进行了优化。预混液在优化的 PCR 缓冲液中包含我们专有的 TAQuest 热启动 Taq DNA 聚合酶和 dNTP。您只需添加模板和目标引物即可运行所需的 PCR 反应。热启动 Taq DNA 聚合酶允许您在室温下设置 PCR 反应，从而最大限度地减少非特异性产物的形成。该酶与优化的缓冲液结合使用，可确保对所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。 Helixyte Green 嵌入染料无需使用序列特异性探针即可快速检测和分析DNA。该预混液包含少量 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	SYBR Green 滤波片

样品实验方案
注意在室温下用 Helixyte Green *低ROX* 解冻 TAQuest™ qPCR Master Mix。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低 ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

A SYBR Green I-based real-time polymerase chain reaction assay for detection and quantification of canine bufavirus.
Authors: Wang, Yong and Sun, Jianfei and Guo, Xu and Li, Wei and Zhang, Da and Liu, Guangqing and Zhou, Tianhong and Li, Yongdong
Journal: Molecular and cellular probes (2021): 101762

A duplex SYBR green I-based real-time polymerase chain reaction assay for concurrent detection of feline parvovirus and feline coronavirus.
Authors: Sun, Liting and Xu, Zhiqing and Wu, Junhuang and Cui, Yongqiu and Guo, Xu and Xu, Fazhi and Li, Yongdong and Wang, Yong
Journal: Journal of virological methods (2021): 114294

A new SYBR Green real-time PCR to detect SARS-CoV-2.
Authors: Marinowic, D R and Zanirati, G and Rodrigues, F V F and Grahl, M V C and Alcará, A M and Machado, D C and Da Costa, J C
Journal: Scientific reports (2021): 2224

A novel duplex SYBR Green real-time PCR with melting curve analysis method for beef adulteration detection.
Authors: Li, Jiapeng and Wei, Yixuan and Li, Jinchun and Liu, Ruixi and Xu, Suigen and Xiong, Suyue and Guo, Ya and Qiao, Xiaoling and Wang, Shouwei
Journal: Food chemistry (2021): 127932

A rapid and low-cost protocol for the detection of B.1.1.7 lineage of SARS-CoV-2 by using SYBR Green-based RT-qPCR.
Authors: Abdel Sater, Fadil and Younes, Mahmoud and Nassar, Hassan and Nguewa, Paul and Hamze, Kassem
Journal: Molecular biology reports (2021): 7243-7249

Design and characterization of a SYBR Green I-based melting curve method for investigation of HER2I655V polymorphism in breast cancer.
Authors: Desriani and Azamris and Ghaissani, Shabrina S and Kinanti, Senja R and Warisman, Muhammad A and Fitria, N
Journal: Journal, genetic engineering & biotechnology (2021): 6

Development and Validation of a SYBR Green Real Time PCR Protocol for Detection and Quantification of Nervous Necrosis Virus (NNV) Using Different Standards.
Authors: Olveira, José G and Souto, Sandra and Bandín, Isabel and Dopazo, Carlos P
Journal: Animals : an open access journal from MDPI (2021)

Development and application of SYBR Green Ⅰ real-time quantitative reverse transcription PCR assay for detection of swine Getah virus.
Authors: Xia, Yin-He and Shi, Zi-Cong and Wang, Xin-Wei and Li, Yong-Tao and Wang, Zeng and Chang, Hong-Tao and Liu, Hong-Ying and Chen, Lu and Wang, Chuan-Qing and Yang, Xia
Journal: Molecular and cellular probes (2021): 101730

Development of New PCR Assay with SYBR Green I for Detection of Mycoplasma, Acholeplasma, and Ureaplasma sp. in Cell Cultures.
Authors: Krzysztoń-Russjan, Jolanta and Chudziak, Jakub and Bednarek, Małgorzata and Anuszewska, Elżbieta Lidia
Journal: Diagnostics (Basel, Switzerland) (2021)

Development of SYBR Green I-based polymerase chain reaction for feline bocavirus 1 detection.
Authors: Wang, Yong and Li, Wei and Guo, Xu and Zhang, Da and Sun, Jianfei and Fu, Ziteng and Liu, Guangqing and Li, Yongdong and Jiang, Shudong
Journal: 3 Biotech (2021): 61

说明书

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*.pdf

Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法) 货号15273-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

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Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法)

货号	15273	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	250 Tests	价格	4584
Ex (nm)	460	Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（比色法）是美国AAT Bioquest研发的检测NAD/NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）是细胞中发现的两种重要的辅酶。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADH（NADPH）是NAD（NADP）的还原形式，NAD（NADP）是NADH（NADPH）的氧化形式。 NAD或NADP在氧化还原反应中起辅助因子的作用，在细胞反应中转移电子。氧化形式和还原形式之间的平衡是NAD / NADH（NADP / NADPH）比率。该比率是指示细胞氧化还原状态的重要组分，并且它是反映代谢活性和细胞健康的测量。在健康的哺乳动物组织中，游离NAD +和NADH之间的比率的估计可以高达700.相反，NADP / NADPH比率通常为约0.005，因此NADPH是该辅酶的主要形式。

该Amplite 比色NAD / NADH比率分析试剂盒提供了一种比色法，用于测量培养细胞中细胞内总NAD / NADH量和NAD / NADH比率。在该测定中，裂解物中的NAD可以用NAD提取溶液提取并通过酶反应转化为NADH，然后通过NADH探针识别，在反应后得到黄色染料，其在460nm处具有吸光度。产生的染料量与细胞裂解物中NAD或NADH的浓度成正比，可用作细胞NAD / NADH浓度的指示剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NAD/NADH检测试剂盒。

Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法) 货号15273

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收：	460nm
推荐孔板：	透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备25μLNADH标准品和/或测试样品在室温下

加入25μLNAD提取液孵育15分钟

加入25μL中和溶液加入75μLNAD/ NADH反应混合物在

室温下孵育15分钟至2小时

监测在460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NAD / NADH反应混合物：

2.1将8 mL NADH探针缓冲液（组分B-II）加入到NAD / NADH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NAD / NADH反应混合物足以进行125~200次分析。未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备连续稀释的NADH标准品（0至10μM）：

3.1将10μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 M系列稀释的NADH标准品。

4.运行总NAD / NADH分析（总共400个分析/试剂盒）：

4.1如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本NAD / NADH裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

表1.白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS
NS1	NS1	….	….
NS2	NS2
NS3	NS3
NS4	NS4
NS5	NS5
NS6	NS6
NS7	NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

NADH Standard	Blank Control	Test Sample
Serial Dilutions*: 50 μL	PBS: 50 μL	50 μL

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.078μM至5μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

4.2将50μLNAD/ NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中，以使总NAD / NADH测定体积为100μL/孔。

4.3在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.4使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

5.运行NAD / NADH比率分析（总共250个分析/试剂盒）：

5.1如表3和4中所述，将连续稀释的NADH标准品和/或含NAD / NADH的测试样品加入白色/透明96孔微孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

表3.白色/透明96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS	TS (NAD)	TS (NAD)
NS1	NS1	….	….	….	….
NS2	NS2
NS3	NS3
NS4	NS4
NS5	NS5
NS6	NS6
NS7	NS7

注意：NS = NAD / NADH标准; BL =空白对照; TS =测试样品; TS（NAD）=用NAD提取溶液（组分D）处理10至15分钟的测试样品，然后用中和溶液（组分E）中和。

表4.每个孔的试剂组合物

NADH Standard	Blank Control	Test Sample (NAD/NADH)	Test Sample (NAD Extract)
Serial Dilutions*: 25 μL	PBS: 25 μL	Test Sample: 25 μL	Test Sample: 25 μL
Component F: 25 μL	Component F: 25 μL	Component F: 25 μL	Component D: 25 μL
Incubate at room temperature for 10 to 15 minutes
Component F: 25 μL	Component F: 25 μL	Component F: 25 μL	Component E: 25 μL
Total: 75 μL	Total: 75 μL	Total: 75 μL	Total: 75 μL

5.2对于NAD提取（NAD量）：将25μLNAD提取溶液（组分D）加入含有NAD / NADH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μLNADH中和溶液（组分E）以中和NAD提取物，如表3和4中所述。

对于总NAD和NADH（总量）：将25μLNAD/ NADH对照溶液（组分F）加入NADH标准品和含有NAD / NADH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后如表3和4中所述添加25μL提取对照溶液（组分F）。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

5.3将75μL的NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（NAD / NADH和NAD提取物）（来自步骤5.1）的每个孔中，使总NADH测定体积为150μL /好。

5.4在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

5.5使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

空白孔（仅PBS缓冲液）中的吸光度用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。

Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法) 货号15273

图1. Amplite™比色NAD / NADH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微孔板中的总NAD / NADH量和NAD / NADH比率。

A-总NADH和NAD剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.1μM的总NADH。

B-NAD / NADH比：在有或没有NAD提取溶液的情况下处理等量的NAD和NADH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。在460nm读取信号。基于图1B中所示的吸光度计算NAD / NADH摩尔比。

附录：使用组分D（裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：用200mg / mL的裂解缓冲液均质化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌细胞样品：离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟.2500℃离心转速5分钟，并用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样品：从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液保持在室温下 15分钟。直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

参考文献

β-Lapachone protects against doxorubicin-induced nephrotoxicity via NAD+/AMPK/NF-kB in mice
Authors: Davoud Sanajou, Saeed Nazari Soltan Ahmad, Vahid Hosseini, Ashkan Kalantary-Charvadeh, Yasser Marandi, Leila Roshangar, Saman Bahrambeigi, Mehran Mesgari-Abbasi
Journal: Naunyn-Schmiedeberg’s archives of pharmacology (2019): 1–8

Enhanced NADH Metabolism Involves Colistin-Induced Killing of Bacillus subtilis and Paenibacillus polymyxa
Authors: Zhiliang Yu, Yuyi Zhu, Jianv Fu, Juanping Qiu, Jianhua Yin
Journal: Molecules (2019): 387

Engineering Corynebacterium crenatum for enhancing succinic acid production
Authors: Xiaoju Chen, Yaojie Zhou, Di Zhang
Journal: Journal of Food Biochemistry (2018): e12645

Influence of Boric Acid on Energy Metabolism and Stress Tolerance of Candida albicans
Authors: Martin Schmidt, Dominic Tran-Nguyen, Patrick Chizek
Journal: Journal of Trace Elements in Medicine and Biology (2018)

Loss of sirtuin 1 and mitofusin 2 contributes to enhanced ischemia/reperfusion injury in aged livers
Authors: Sung Kook Chun, Sooyeon Lee, Joseph Flores-Toro, Rebecca Y U, Ming-Jim Yang, Kristina L Go, Thomas G Biel, Catherine E Miney, Schiley Pierre Louis, Brian K Law
Journal: Aging Cell (2018): e12761

Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathway
Authors: Qi Lv, Kai Wang, Simiao Qiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng Wei
Journal: Cell death & disease (2018): 258

Optically-controlled bacterial metabolite for cancer therapy
Authors: Di-Wei Zheng, Ying Chen, Zi-Hao Li, Lu Xu, Chu-Xin Li, Bin Li, Jin-Xuan Fan, Si-Xue Cheng, Xian-Zheng Zhang
Journal: Nature communications (2018)

Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formation
Authors: Naoki Yamamoto, Rino Isshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, Tetsushi Sekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi Tsuneda
Journal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

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产品名称	货号
Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法)	Cat#15274
Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（荧光法）红色荧光	Cat#15263
Amplite NADH检测试剂盒（荧光法）红色荧光	Cat#15261

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TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低ROX 货号17273-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

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TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低ROX

货号	17273	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mL	价格	3612
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17273

产品名称：TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*

规格：5ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

适用仪器

qPCR
仪器规格	SYBR Green 滤波片

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 低 ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

说明书

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *低ROX*.pdf

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法) 货号15274-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法)

货号	15274	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	250 Tests	价格	4584
Ex (nm)	460	Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒（比色法）是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）是细胞中发现的两种重要的辅酶。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADH（NADPH）是NAD（NADP）的还原形式，NAD（NADP）是NADH（NADPH）的氧化形式。 NAD或NADP在氧化还原反应中起辅助因子的作用，在细胞反应中转移电子。氧化形式和还原形式之间的平衡是NAD / NADH（NADP / NADPH）比率。该比率是指示细胞氧化还原状态的重要组分，并且它是反映代谢活性和细胞健康的测量。在健康的哺乳动物组织中，游离NAD和NADH之间的比率的估计可以高达700。相反，NADP / NADPH比率通常为约0.005，因此NADPH是该辅酶的主要形式。

该Amplite 比色NADP / NADPH比率分析试剂盒提供了一种比色法，用于测量培养细胞中细胞内总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。在该测定中，裂解物中的NADPH可以用NADPH提取溶液提取，然后通过NADPH探针识别，在反应后得到黄色染料，其在460nm处具有吸光度。产生的染料量与细胞裂解物中NADP或NADPH的浓度成正比，可用作细胞NADP / NADPH浓度的指示剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADP/NADPH检测试剂盒。

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法) 货号15274

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收：	460nm
推荐孔板：	透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备25μLNADPH标准品和/或测试样品

加入25μLNADPH提取液

在室温下孵育15分钟

加入25μL中和溶液

加入75μLNADPP/ NADPH反应混合物在室温下孵育15分钟至2小时监测在460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

2.1将8mL NADPH探针缓冲液（组分B-II）加入到NADP / NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADPH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以进行125~200次分析。未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备连续稀释的NADPH标准品（0至2μM）：

3.1将2L 1mM NADPH储备溶液（来自步骤1）加入998L PBS缓冲液（pH7.4）中，产生2M（2 pmols / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL2MNADPH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到1，0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313和0M系列稀释的NADPH标准品。

4.运行总NADP / NADPH分析（总共400个分析/试剂盒）：

4.1如说明书中的表1和2中所述，将NADPH标准品和含有NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2将50μL的NADP / NADPH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中，以使总NADP / NADPH测定体积为100μL/孔。

4.3在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.4使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

5.运行NADP / NADPH比率分析（总共250个分析/试剂盒）：

5.1如说明书中的表3和4中所述，将连续稀释的NADPH标准品和/或含NADP / NADPH的测试样品加入白色/透明96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。

5.2对于NADPH提取（NADPH量）：将25μLNADPH提取溶液（组分D）加入含有NADP / NADPH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μL中和溶液（组分E）以中和NADPH提取物，如说明书中的表3和4中所述。

对于总NADP和NADPH（总量）：将25μLNADPP/ NADPH对照溶液（组分F）加入NADPH标准品的孔和含有NADP / NADPH的测试样品中。在室温下孵育10至15分钟，然后如说明书中的表3和4中所述添加25μL提取对照溶液（组分F）。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

5.3将75μL的NADP / NADPH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品（NADP / NADPH）的每个孔中，并测试样品（NADPH提取物）（来自步骤5.1）以使总量达到测定体积为150μL/孔。

5.4在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

5.5使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

空白孔中的吸光度（仅PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法) 货号15274

图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟，用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

试剂应用文献

Impact of Genetic Reduction of NMNAT2 on Chemotherapy-Induced Losses in Cell Viability In Vitro and Peripheral Neuropathy In Vivo
Authors: Slivicki, Richard A and Ali, Yousuf O and Lu, Hui-Chen and Hohmann, Andrea G
Journal: PloS one (2016): e0147620

NMNAT2: HSP90 Complex Mediates Proteostasis in Proteinopathies
Authors: Ali, Yousuf O and Allen, Hunter M and Yu, Lei and Li-Kroeger, David and Bakhshizadehmahmoudi, Dena and Hatcher, Asante and McCabe, Cristin and Xu, Jishu and Bjorklund, Nicole and Taglialatela, Giulio and others
Journal: PLoS Biol (2016): e1002472

ACLY and ACC1 Regulate Hypoxia-Induced Apoptosis by Modulating ETV4 via α-ketoglutarate
Authors: Keenan, Melissa M and Liu, Beiyu and Tang, Xiaohu and Wu, Jianli and Cyr, Derek and Stevens, Robert D and Ilkayeva, Olga and Huang, Zhiqing and Tollini, Laura A and Murphy, Susan K and others
Journal: PLoS Genet (2015): e1005599

Analysis of the nicotinamide phosphoribosyltransferase family provides insight into vertebrate adaptation to different oxygen levels during the water-to-land transition
Authors: Fang, Chengchi and Guan, Lihong and Zhong, Zaixuan and Gan, Xiaoni and He, Shunping
Journal: FEBS journal (2015): 2858–2878

Metformin-induced energy deficiency leads to the inhibition of lipogenesis in prostate cancer cells
Authors: Loubière, Camille and Goiran, Thomas and Laurent, Kathiane and Djabari, Zied and Tanti, Jean-Frančois and Bost, Frédéric
Journal: Oncotarget (2015): 15652

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Aurich, Maike K and Paglia, Giuseppe and Rolfsson, Ottar and Hrafnsdóttir, Sigrún and Magnúsdóttir, Manuela and Stefaniak, Magdalena M and Palsson, Bernhard O and Fleming, Ronan MT and Thiele, Ines
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

参考文献

Enhanced metabolic activities for ATP production and elevated metabolic flux via pentose phosphate pathway contribute for better CIK cells expansion
Authors: Weiwei Zhang, Huimin Huang, Haibo Cai, Wen-Song Tan
Journal: Cell proliferation (2019)

Soluble α-Klotho treatment protects adenine-induced uremia rats from sciatic nerve damage
Authors: Yingdan Zhao, Jun Ma, Bo Gu, Yang Yi, Hanqing Wang, Zhiyong Guo
Journal: Biomedical Research (2018)

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

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产品名称	货号
Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法)	Cat#15273
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说明书

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法).pdf

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 高ROX 货号17274-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *高ROX*

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 高ROX

货号	17274	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mL	价格	1164
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17274

产品名称：TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *高ROX*

规格：1ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 是一种即用型 2X溶液，针对 qPCR 和 2 步 RT-qPCR 进行了优化。预混液在优化的 PCR 缓冲液中包含我们专有的 TAQuest 热启动 Taq DNA 聚合酶和 dNTP。您只需添加模板和目标引物即可运行所需的 PCR 反应。热启动 Taq DNA 聚合酶允许您在室温下设置 PCR 反应，从而最大限度地减少非特异性产物的形成。该酶与优化的缓冲液结合使用，可确保对所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。 Helixyte Green 嵌入染料无需使用序列特异性探针即可快速检测和分析DNA。该预混液包含大量ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *高ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	SYBR Green 滤波片

样品实验方案
注意在室温下用 Helixyte Green *高ROX* 解冻 TAQuest™ qPCR Master Mix。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 高 ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

Aligned Expression of IFI16 and STING Genes in RRMS Patients’ Blood.
Authors: Helbi, Sobhan and Ravanbakhsh, Behnam and Karimi, Mohammad and Kooti, Wesam and Jivad, Nahid
Journal: Endocrine, metabolic & immune disorders drug targets (2020): 878-886

SNPs and transcriptional activity of genes of innate and adaptive immunity at the maternal-fetal interface in woman with preterm labour, associated with preterm premature rupture of membranes.
Authors: Lyubomirskaya, Ekaterina S and Kamyshnyi, Alexandr M and Krut, Yuriy Ya and Smiianov, Vladyslav A and Fedoniuk, Larisa Ya and Romanyuk, Lidiya B and Kravets, Natalya Ya and Mochulska, Oksana M
Journal: Wiadomosci lekarskie (Warsaw, Poland : 1960) (2020): 25-30

Real-Time Reverse Transcription PCR as a Tool to Study Virulence Gene Regulation in Bacterial Pathogens.
Authors: Aviv, Gili and Gal-Mor, Ohad
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2018): 23-32

An improved RT-IPCR for detection of pyrene and related polycyclic aromatic hydrocarbons.
Authors: Meng, X Y and Li, Y S and Zhou, Y and Sun, Y and Qiao, B and Si, C C and Hu, P and Lu, S Y and Ren, H L and Liu, Z S and Qiu, H J and Liu, J Q
Journal: Biosensors & bioelectronics (2016): 194-199

Analysis of P. gingivalis, T. forsythia and S. aureus levels in edentulous mouths prior to and 6 months after placement of one-piece zirconia and titanium implants.
Authors: Siddiqi, Allauddin and Milne, Trudy and Cullinan, Mary P and Seymour, Gregory J
Journal: Clinical oral implants research (2016): 288-94

Real-time immuno-PCR for ultrasensitive detection of pyrene and other homologous PAHs.
Authors: Meng, X Y and Li, Y S and Zhou, Y and Zhang, Y Y and Qiao, B and Sun, Y and Yang, L and Hu, P and Lu, S Y and Ren, H L and Zhang, J H and Wang, X R and Liu, Z S
Journal: Biosensors & bioelectronics (2015): 42-7

Real-time polymerase chain reaction based on msa2c gene for detection of Babesia bovis.
Authors: Ramos, Carlos A N and Araújo, Flábio R and Souza, Ingrid I F and Bacanelli, G and Luiz, Hera L and Russi, Lívia S and Oliveira, Renato H M and Soares, Cleber O and Rosinha, Grácia M S and Alves, Leucio C
Journal: Veterinary parasitology (2011): 79-83

说明书

TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green *高ROX*.pdf

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度货号15276-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

货号	15276	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	400 Tests	价格	3924
Ex (nm)	460	Em (nm)
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 总NADP和NADPH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度是美国AAT Bioquest研发的检测总NADP和NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite™比色总NADP / NADPH检测试剂盒为检测总NADP和NADPH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NADP / NADPH。无需从样品混合物中纯化NADP / NADPH。酶循环反应显着提高了检测灵敏度。 NADPH探针是一种生色传感器，在NADP减少时具有460nm的最大吸光度。 NADPH探针的吸收与溶液中NADPH的浓度成正比。 Amplite™比色总NADP和NADPH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至0.03μM的总NADP / NADPH。与试剂盒＃15260相比，该试剂盒具有更高的灵敏度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的总NADP和NADPH检测试剂盒。

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收：	460nm
推荐孔板：	透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADP / NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟至2小时

监测460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

2.1将8mL NADPH探针缓冲液（组分B-II）加入到NADP / NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADPH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以进行200次分析。未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至2μM）：

3.1将2L 1mM NADPH储备溶液（来自步骤1）加入998L PBS缓冲液（pH7.4）中，产生2M（2 pmols / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL2MNADPH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到1，0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313和0M系列稀释的NADPH标准品。

3.3如表1和2中所述，将含有NADPH标准品和含NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

表1：白色/透明底96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS
NS1	NS1	….	….
NS2	NS2
NS3	NS3
NS4	NS4
NS5	NS5
NS6	NS6
NS7	NS7

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2：每个孔的试剂组成

NADPH Standard	Blank Control	Test Sample
Serial Dilutions*: 50 μL	PBS: 50 μL	50 μL

*注意：将连续稀释的NADPH标准品（0.0313μM至2μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。高浓度的NADPH（例如，>30μM，最终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

4.在上清液反应中运行NADPH测定：

4.1将50μL的NADP / NADPH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADP / NADPH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADP/ NADPH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

空白孔中的吸光度（仅PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度货号15276

图1 使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite ™比色总NADP和NADPH测定试剂盒*增强灵敏度*测量NADPH剂量反应。孵育1小时（n = 3）可以检测到低至0.03μM的NADPH，在460nm处测量吸光度。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：用200mg / mL的裂解缓冲液均质化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌细胞样品：离心收集细菌细胞（（10,000 g，℃，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟.2500℃离心转速5分钟，并用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样品：从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液保持在室温下 15分钟。直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

参考文献

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

相关产品

产品名称	货号
Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒(比色法)	Cat#15260
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说明书

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度.pdf

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green 无ROX 货号17276-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green 无ROX

货号	17276	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mL	价格	1164
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17276

产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*

规格：1ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green 是一种即用型 2X溶液，针对 qPCR 和两步法 RT-qPCR 进行了优化。对于 20 uL 反应体积中的 40 个 PCR 循环，预混液可在 50 分钟内提供结果。该混合物包括含有 dNTP 的优化缓冲液和我们专有的 TAQuest FAST 热启动 Taq DNA 聚合酶，该酶旨在允许即时热启动，最大限度地减少非特异性产物的形成，从而允许室温反应设置。运行所需的 PCR 反应只需要模板和目标引物。 TAQuest FAST qPCR Master Mix 与 Helixyte Green 确保 PCR 特异性和灵敏度对所有样品类型，如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板。 Helixyte Green 嵌入染料无需使用序列特异性探针即可快速检测和分析 DNA。该预混液不含 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	SYBR Green 滤波片

样品实验方案
注意在室温下用 Helixyte Green *无ROX* 解冻 TAQuest™ FAST qPCR Master Mix。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 无 ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

Fatal systemic toxoplasmosis in a 3-month-old young tibetan goat (Capra hircus).
Authors: Pavone, Silvia and Crotti, Silvia and Cruciani, Deborah and D’Avino, Nicoletta and Zema, Jacopo and Morelli, Simone and Gobbi, Marco and Madeo, Laura
Journal: BMC veterinary research (2020): 423

Development of four PCR-based methods to differentiate tilefish species (Branchiostegus japonicus and B. albus).
Authors: Kang, Tae Sun
Journal: Food chemistry (2019): 1-8

A multi-screening Fast qPCR approach to the identification of abortive agents in ruminants.
Authors: Sebastiani, Carla and Curcio, Ludovica and Ciullo, Marcella and Cruciani, Deborah and Crotti, Silvia and Pesca, Cristina and Torricelli, Martina and Sebastianelli, Martina and Felici, Andrea and Biagetti, Massimo
Journal: Journal of microbiological methods (2018): 12-17

A rapid real-time PCR method to differentiate between mottled skate (Beringraja pulchra) and other skate and ray species.
Authors: Kim, Mi-Ra and Kwon, Kisung and Jung, Yoo-Kyung and Kang, Tae Sun
Journal: Food chemistry (2018): 112-119

Development of a Sensitive Real-Time Fast-qPCR Based on SYBR® Green for Detection and Quantification of Chicken Parvovirus (ChPV).
Authors: Nuñez, Luis F and Santander-Parra, Silvana H and Chaible, Lucas and De la Torre, David I and Buim, Marcos R and Murakami, Alexandre and Zaidan Dagli, Maria Lucia and Astolfi-Ferreira, Claudete S and Piantino Ferreira, Antonio J
Journal: Veterinary sciences (2018)

Evaluation and utilization of preassembled frozen commercial fast real-time qPCR master mixes for detection of cytomegalovirus and BK virus.
Authors: Glover, William A and Atienza, Ederlyn E and Nesbitt, Shannon and Kim, Woo J and Castor, Jared and Cook, Linda and Jerome, Keith R
Journal: Journal of medical virology (2016): 115-9

Fast quantitative PCR, locked nucleic acid probes and reduced volume reactions are effective tools for detecting Batrachochytrium dendrobatidis DNA.
Authors: Ruthig, Gregory R and Deridder, Benjamin P
Journal: Diseases of aquatic organisms (2012): 249-53

Multi-platform comparison of ten commercial master mixes for probe-based real-time polymerase chain reaction detection of bioterrorism threat agents for surge preparedness.
Authors: Buzard, Gregory S and Baker, Daniel and Wolcott, Mark J and Norwood, David A and Dauphin, Leslie A
Journal: Forensic science international (2012): 292-7

Real-time quantitative PCR and fast QPCR have similar sensitivity and accuracy with HIV cDNA late reverse transcripts and 2-LTR circles.
Authors: Yoder, Kristine E and Fishel, Richard
Journal: Journal of virological methods (2008): 253-6

Detection of equine herpesvirus-1 in nasal swabs of horses by quantitative real-time PCR.
Authors: Perkins, G A and Goodman, L B and Dubovi, E J and Kim, S G and Osterrieder, N
Journal: Journal of veterinary internal medicine: 1234-8

说明书

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*.pdf

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green 无ROX 货号17277-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月17日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green 无ROX

货号	17277	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mL	价格	3612
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17277

产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*

规格：5ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

适用仪器

qPCR
仪器规格	SYBR Green 滤波片

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix with Helixyte Green 无 ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

Development of four PCR-based methods to differentiate tilefish species (Branchiostegus japonicus and B. albus).
Authors: Kang, Tae Sun
Journal: Food chemistry (2019): 1-8

说明书

TAQuest FAST qPCR Master Mix with Helixyte Green *无ROX*.pdf

TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX 货号17286-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*

TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX

货号	17286	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mL	价格	1164
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17286

产品名称：TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*

规格：1ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

用于 TaqMan 探针的 TAQuest qPCR Master Mix 是一种即用型 2X溶液，针对 qPCR 和与 TaqMan 基因表达分析兼容的两步法 RT-qPCR 进行了优化。预混液在优化的 PCR 缓冲液中提供了所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest 热启动 Taq DNA 聚合酶和 dNTP，但模板、引物和探针除外。热启动 Taq DNA 聚合酶允许您在室温下设置 PCR 反应，从而最大限度地减少非特异性产物的形成。优化的成分可确保 PCR 对所有样本类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的特异性和灵敏度。用于 TaqMan 探针的 TAQuest qPCR Master Mix 设计用于使用内部阳性对照的双链反应。该预混液含大量 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	基于探针的滤波片

样品实验方案
注意在室温下解冻TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

Resilient SARS-CoV-2 diagnostics workflows including viral heat inactivation.
Authors: Lista, Maria Jose and Matos, Pedro M and Maguire, Thomas J A and Poulton, Kate and Ortiz-Zapater, Elena and Page, Robert and Sertkaya, Helin and Ortega-Prieto, Ana M and Scourfield, Edward and O’Byrne, Aoife M and Bouton, Clement and Dickenson, Ruth E and Ficarelli, Mattia and Jimenez-Guardeño, Jose M and Howard, Mark and Betancor, Gilberto and Galao, Rui Pedro and Pickering, Suzanne and Signell, Adrian W and Wilson, Harry and Cliff, Penelope and Kia Ik, Mark Tan and Patel, Amita and MacMahon, Eithne and Cunningham, Emma and Doores, Katie and Agromayor, Monica and Martin-Serrano, Juan and Perucha, Esperanza and Mischo, Hannah E and Shankar-Hari, Manu and Batra, Rahul and Edgeworth, Jonathan and Zuckerman, Mark and Malim, Michael H and Neil, Stuart and Martinez-Nunez, Rocio Teresa
Journal: PloS one (2021): e0256813

Development of a multiplex TaqMan qPCR assay for simultaneous detection and differentiation of four DNA and RNA viruses from clinical samples of sheep and goats.
Authors: Xu, Xingang and Yang, Feng and Zhang, Qi and Xu, Ying and Huang, Jiali and Fu, Mingzhe and Zhang, Weimin
Journal: Journal of virological methods (2019): 58-64

Frequency-encoded laser-induced fluorescence for multiplexed detection in infrared-mediated quantitative PCR.
Authors: Schrell, Adrian M and Roper, Michael G
Journal: The Analyst (2014): 2695-701

Real-time stability testing of air-dried primers and fluorogenic hydrolysis probes stabilized by trehalose and xanthan.
Authors: Rombach, Markus and Kosse, Dominique and Faltin, Bernd and Wadle, Simon and Roth, Günter and Zengerle, Roland and von Stetten, Felix
Journal: BioTechniques (2014): 151-5

Development of a novel internal positive control for Taqman based assays.
Authors: Hartman, Laurie J and Coyne, Susan R and Norwood, David A
Journal: Molecular and cellular probes (2005): 51-9

[Establishment and application of real-time fluorescence polymerase chain reaction based on the TaqMan probes for detection of Yersinia pestis].
Authors: Li, Wei and Hai, Rong and Yu, Dong-zheng and Zhang, Zhi-kai and Cai, Hong
Journal: Zhonghua liu xing bing xue za zhi = Zhonghua liuxingbingxue zazhi (2005): 613-6

[Multiplex PCR for detection and quantification of GM potato event EH92-527-1 in food].
Authors: Tyshko, N V and Sadykova, E O and Grouzdev, D S and Sukhacheva, M V
Journal: Voprosy pitaniia: 57-61

[Multiplex polymerase chain reaction for genetically modified potato event AV43-6-G7 quantification. Proof of efficiency].
Authors: Tyshko, N V and Sadykova, E O and Sukhacheva, M V and Grouzdev, D S
Journal: Voprosy pitaniia: 62-70

说明书

TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*.pdf

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针无ROX 货号17289-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针无ROX

货号	17289	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mL	价格	3612
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17289

产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*

规格：5ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 是一种即用型 2X 溶液，针对 qPCR 和两步法 RT-qPCR 进行了优化，非常适合用于 TaqMan 基因表达分析。预混液与 FAST 条件兼容，因此在 20 uL 反应体积中进行 40 个 PCR 循环，可在 50 分钟内提供结果。预混液提供所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest FAST 热启动 Taq DNA 聚合酶和优化的 PCR 缓冲液中的 dNTP，但模板、引物和探针除外。用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 设计用于使用具有卓越性能的内部阳性对照进行双重反应。预混液可确保所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。该预混液不含 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	基于探针的滤波片

样品实验方案
注意在室温下解冻TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针无ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

Evaluation of the efficiency of TaqMan duplex real-time PCR assay for non-invasive pre-natal assessment of foetal sex in equine.
Authors: Kadivar, Ali and Rashidzadeh, Habiballah and Davoodian, Najmeh and Nazari, Hasan and Dehghani Tafti, Rohallah and Heidari Khoei, Heidar and Seidi Samani, Hasan and Modaresi, Jahangir and Ahmadi, Ebrahim
Journal: Reproduction in domestic animals = Zuchthygiene (2021): 287-291

Fast and Sensitive Real-Time PCR Detection of Major Antiviral-Drug Resistance Mutations in Chronic Hepatitis B Patients by Use of a Predesigned Panel of Locked-Nucleic-Acid TaqMan Probes.
Authors: Chu, Son V and Vu, Son T and Nguyen, Hang M and Le, Ngan T and Truong, Phuong T and Vu, Van T T and Phung, Thuy T B and Nguyen, Anh T V
Journal: Journal of clinical microbiology (2021): e0093621

Multiplex TaqMan Real-Time PCR Assay for Sensitive Detection of Two Weevil Species (Coleoptera: Curculionidae).
Authors: Aguirre, Carlos and Sánchez, Evelyn and Olivares, Natalia and Hinrichsen, Patricio
Journal: Journal of economic entomology (2021): 90-99

A TaqMan-based quantitative real-time PCR assay for identification of the goose circovirus.
Authors: Yang, Kan-Kan and Yin, Dong-Dong and Xu, Liang and Liang, Yue-Qiao and Tu, Jian and Song, Xiang-Jun and Shao, Ying and Liu, Hong-Mei and Qi, Ke-Zong
Journal: Molecular and cellular probes (2020): 101564

A development strategy to fast establish the Taqman qPCR based method to detect SNP mutations.
Authors: Jiang, Xiaohui and Xiang, Junbei and Wang, Ruifeng and Wan, Qian
Journal: Human cell (2020): 1331-1333

BlueTYPE – A low density TaqMan-RT-qPCR array for the identification of all 24 classical Bluetongue virus serotypes.
Authors: Ries, Christina and Beer, Martin and Hoffmann, Bernd
Journal: Journal of virological methods (2020): 113881

Brief comparative evaluation of six open one-step RT-qPCR mastermixes for the detection of SARS-CoV-2 RNA using a Taqman probe.
Authors: Haddar, Cyrille and Verhoeven, Paul O and Bourlet, Thomas and Pozzetto, Bruno and Pillet, Sylvie
Journal: Journal of clinical virology : the official publication of the Pan American Society for Clinical Virology (2020): 104636

Development of a new TaqMan-based PCR assay for the specific detection and quantification of Simkania negevensis.
Authors: Baccari, Olfa and Elleuch, Jihen and Barkallah, Mohamed and Boukedi, Hanen and Ayed, Nourelhouda Ben and Hammami, Adnene and Fendri, Imen and Abdelkafi, Slim
Journal: Molecular and cellular probes (2020): 101645

One-step multiplex TaqMan probe-based method for real-time PCR detection of four canine diarrhea viruses.
Authors: Wang, Ruyi and Zhang, Wenyan and Ye, Rui and Pan, Zhongzhou and Li, Gairu and Su, Shuo
Journal: Molecular and cellular probes (2020): 101618

Quantification of Major Bacteria and Yeast Species in Kefir Consortia by Multiplex TaqMan qPCR.
Authors: Nejati, Fatemeh and Junne, Stefan and Kurreck, Jens and Neubauer, Peter
Journal: Frontiers in microbiology (2020): 1291

说明书

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*.pdf

Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒货号15291-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒

货号	15291	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	6564
Ex (nm)	535	Em (nm)	557
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用PE通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

流式细胞仪
激发：	488nm激光
发射：	575/26nm 滤波片
通道：	PE通道

产品说明书

实验示例

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器在37ºC下孵育30-60分钟
3.洗涤细胞并将其保存在测定缓冲液中
4.使用PE通道通过流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中以1×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在您选择的无血清培养基或缓冲液中。或者，可以制备细胞并在常规完全培养基中处理。与JZL1707 NAD（P）H Sensor孵育时，请更改为无血清培养基或您选择的缓冲液。
在37ºC下将细胞与测试化合物一起孵育所需的时间，以刺激细胞内的NADH / NADPH。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。

2.将1 µL JZL1707 NAD（P）H传感器（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。在37ºC下孵育30-60分钟。注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100 µM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，然后与JZL1707 NAD（P）H Sensor工作溶液在37ºC共同孵育30分钟。分钟。有关详细信息，请参见图1。

3.用所需的缓冲液洗涤细胞一次。将细胞保存在测定缓冲液（组分B）中。

4.使用流式细胞仪监测PE通道的荧光强度。

参考文献

产品名称	货号
Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光	Cat#15296

说明书

Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒.pdf

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针低ROX 货号17291-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针低ROX

货号	17291	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mL	价格	3612
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17291

产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*

规格：5ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 是一种即用型 2X 溶液，针对 qPCR 和两步法 RT-qPCR 进行了优化，非常适合用于 TaqMan 基因表达分析。预混液与 FAST 条件兼容，因此在 20 uL 反应体积中进行 40 个 PCR 循环，可在 50 分钟内提供结果。预混液提供所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest FAST 热启动 Taq DNA 聚合酶和优化的 PCR 缓冲液中的 dNTP，但模板、引物和探针除外。用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 设计用于使用具有卓越性能的内部阳性对照进行双重反应。预混液可确保所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。该预混液含少量 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	基于探针的滤波片

样品实验方案
注意在室温下解冻TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针低ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

说明书

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*.pdf

NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑 CAS 29270-56-2 货号821-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑 CAS 29270-56-2

货号	821	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	5 mg	价格	1272
Ex (nm)	467	Em (nm)	539
分子量	183.1	溶剂	DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：821

产品名称：NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑

CAS：29270-56-2

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：183.1

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：464

发射波长（nm）：537

产品介绍

NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。NBD-F的特性和应用与NBD-Cl相似。与胺和硫醇化合物反应，其产生的荧光产物与NBD-Cl与它们反应的产物相同。NBD-F更容易反应，在存贮时要更加注意。例如，NBD-F与甘氨酸反应比NBD-Cl与甘氨酸反应快500倍。NBD-Cl和NBD-F都广泛地应用为衍生化试剂，用于色谱法分析氨基酸和其它小分子量的胺类。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑。

点击查看光谱

参考文献

Cube-shaped theranostic paclitaxel prodrug nanocrystals with surface functionalization of SPC and MPEG-DSPE for imaging and chemotherapy
Authors: Fuqiang Guo, Jiajia Shang, Hai Zhao, Kangrong Lai, Yang Li, Zhongxiong Fan, Zhenqing Hou, Guanghao Su
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2017)

说明书

NBD-F 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑 CAS 29270-56-2.pdf

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX 货号17292-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX

货号	17292	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	1 mL	价格	1164
Ex (nm)		Em (nm)
分子量		溶剂	Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17292

产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*

规格：1ml

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

产品介绍

用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 是一种即用型 2X 溶液，针对 qPCR 和两步法 RT-qPCR 进行了优化，非常适合用于 TaqMan 基因表达分析。预混液与 FAST 条件兼容，因此在 20 uL 反应体积中进行 40 个 PCR 循环，可在 50 分钟内提供结果。预混液提供所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest FAST 热启动 Taq DNA 聚合酶和优化的 PCR 缓冲液中的 dNTP，但模板、引物和探针除外。用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 设计用于使用具有卓越性能的内部阳性对照进行双重反应。预混液可确保所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。该预混液含大量 ROX 参考染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*。

适用仪器

qPCR
仪器规格	基于探针的滤波片

样品实验方案
注意在室温下解冻TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*。使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。

表 1. 各反应每孔试剂组成

成分	体积 (25 µL/reaction)	体积 (50 µL/reaction)	最终浓度
TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针高ROX	12.5 µL	25 µL	1X
上游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
下游引物，10 µM	0.25-2.5 µL	0.5-5.0 µL	0.1-1.0 µM
DNA模板	1-5 µL	1-5 µL	优化的浓度
无核酸酶水	25 µL	50 µL

表 2. 热循环参数

范围	聚合酶激活	PCR (30-40个循环)
	Hold	变性	退火	延伸
温度	95 °C	95 °C	55-65 °C	68-72 °C
时间 (m:ss)	0:20	0:30	1:00	1:00

参考文献

说明书

TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*高ROX*.pdf

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光货号15296-AAT Bioquest荧光染料

发表于2022年1月16日由Harlan Teklad中国

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光

货号	15296	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	6564
Ex (nm)	593	Em (nm)	655
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。

适用仪器

流式细胞仪
激发：	640nm激光
发射：	660/20nm滤波片
通道：	APC通道

产品说明书

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5 – 1×10⁶细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.使用APC通道用流式细胞仪分析细胞

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中，密度为1×105至1×10⁶个细胞/ mL。

注意1：应对每个细胞系进行单独测评，以确定最佳细胞密度。对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也兼容。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。优化每个实验的孵育时间。

3.将1μL JJ1902NAD（P）H探针（组分A）加入0.5 mL细胞悬浮液中。在37℃下孵育30-60分钟。

注意对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共温育30分钟。详细信息请参见说明书中的图1。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪监测APC通道的荧光强度。

参考文献

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Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒	Cat#15291

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