Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 N/A 溶剂
存储条件
产品概述

葡萄糖是一种单糖,是生物学中重要的碳水化合物。它是细胞生长的能量和代谢的中间产物。作为光合作用的主要产物之一,葡萄糖在原核生物和真核生物中都开始细胞呼吸。葡萄糖水平是许多代谢性疾病例如糖尿病的关键诊断参数。该Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒提供了一种快速,灵敏的葡萄糖测量方法。它使用基于葡萄糖氧化酶的酶偶联反应通过产生过氧化氢来检测葡萄糖,该过氧化氢由我们的Amplite Red过氧化物酶底物进行检测。 Amplite Red过氧化物酶底物可通过酶标仪在约570 nm处读取。该测定可以轻松适用于需要测量葡萄糖的多种应用。该测定法具有非常低的背景,因为它在红色可见光范围内运行,可明显降低来自生物样品的干扰。使用Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒,可以检测低至3 µM D-葡萄糖。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒。

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适用仪器


吸光度酶标仪  
推荐孔板: 黑色或白色,透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品(50μL)
准备并添加葡萄糖分析工作溶液(50μL)
在37°C孵育10-30分钟
检测OD值=570nm左右的吸光度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite 红色储备液(250X):
将100μLDMSO(组分E)加入到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意:避免反复冻融循环。注意:在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯基乙醇存在下,Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液(pH 7.4)。

1.2辣根过氧化物酶(HRP)储备液(10 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到辣根过氧化物酶(组分C)的小瓶中。注意:未使用的HRP溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖氧化酶(组分D)的小瓶中。注意:未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性等分试样并储存在-20℃。

1.4葡萄糖原液(800mM):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖小瓶(组分F)中。注意:未使用的葡萄糖溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

2.标准溶液配制

2.1葡萄糖标准溶液配制
通过将适量的800mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液(组分B)中来制备葡萄糖标准品,以产生30μM的葡萄糖浓度。 然后在测定缓冲液(组分B)中进行1:3连续稀释,得到约10,3,1,0.3,0.1和0.03μM连续稀释的葡萄糖标准品。 包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。

 

3.工作溶液配制

表1.一个透明底96孔微孔板的分析工作溶液(2X)

组分 容积
Amplite 红色储备液(250x) 20ul
HRP储备液(10 U / mL) 100ul
葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL) 100ul
分析缓冲液 4.78ml
总容积 5ml

 

操作步骤

表2.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖标准品和测试样品的布局。

GS =葡萄糖标准品(GS1-GS7); BL =空白对照; TS =测试样品。

 

BL BL TS TS
GS1 GS1
GS2 GS2
GS3 GS3    
GS4 GS4    
GS5 GS5    
GS6 GS6    
GS7 GS7    

 

表3.每个孔的试剂组成

葡萄糖标准溶液 空白对照 测试样品
连续稀释:50μL 测定缓冲液(化合物B):50μL 50ul

注意:由于Amplite 红色底物(对非荧光产物)的过氧化,高浓度的葡萄糖(例如测试样品或标准品中的100μM)可能导致荧光信号减少。

 

葡萄糖测定

1.如表2和3中所述,将葡萄糖标准品和含葡萄糖的测试样品加入96孔黑色微孔板中。

2.将50μL葡萄糖测定工作溶液添加到葡萄糖标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(表2),以使总葡萄糖测定体积为100μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟,避光。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm(Ex / Em = 540 / 590nm)监测荧光强度。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算葡萄糖样品。 点击使用在线线性回归计算器。

Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒

图1.使用Gemini酶标仪(Molecular Devices),在96孔黑色平板上用Amplite 荧光葡萄糖定量试剂盒测量葡萄糖剂量反应。

 

试剂应用文献

RIP140 inhibits glycolysis-dependent proliferation of breast cancer cells by regulating GLUT3 expression through transcriptional crosstalk between hypoxia induced factor and p53
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Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2022): 1–17
 
Aspects {‘e}volutifs et environnementaux de la plasticit{‘e} ph{‘e}notypique chez deux Moronid{‘e}s, le bar Europ{‘e}en (Dicentrarchus labrax) et le bar ray{‘e} (Morone saxatilis)
Authors: Gourtay, Clémence
Journal: (2018)
 
MicroRNAs regulate gene plasticity during cold shock in zebrafish larvae
Authors: Hung, I-Chen and Hsiao, Yu-Chuan and Sun, H Sunny and Chen, Tsung-Ming and Lee, Shyh-Jye
Journal: BMC genomics (2016): 922
 
Early nutritional programming in fish: tailoring the metabolic use of dietary carbohydrates
Authors: Rocha, Filipa Soares
Journal: (2015)
 
Glucose metabolism and gene expression in juvenile zebrafish (Danio rerio) challenged with a high carbohydrate diet: effects of an acute glucose stimulus during late embryonic life
Authors: Rocha, Filipa and Dias, Jorge and Engrola, Sofia and Gavaia, Paulo and Geurden, Inge and Dinis, Maria Teresa and Panserat, Stephane
Journal: British Journal of Nutrition (2015): 403–413
 
Glucose overload in yolk has little effect on the long-term modulation of carbohydrate metabolic genes in zebrafish (Danio rerio)
Authors: Rocha, Filipa and Dias, Jorge and Engrola, Sofia and Gavaia, Paulo and Geurden, Inge and Dinis, Maria Teresa and Panserat, Stephane
Journal: Journal of Experimental Biology (2014): 1139–1149
 
Charakterisierung von {ss}-Glucodidasen aus dem Wehrsekret der juvenilen Blattk{“a}fer Phaedon cochleariae und Chrysomela populi
Authors: H{“a}ger, Wiebke
Journal: (2013)
 
Impact of L-FABP and glucose on polyunsaturated fatty acid induction of PPARα-regulated β-oxidative enzymes
Authors: Petrescu, Anca D and Huang, Huan and Martin, Gregory G and McIntosh, Avery L and Storey, Stephen M and L, undefined and rock, Danilo and Kier, Ann B and Schroeder, Friedhelm
Journal: American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology (2013): G241–G256
 
Inhibitors of fatty acid synthesis induce PPARα-regulated fatty acid β-oxidative genes: synergistic roles of L-FABP and glucose
Authors: Huang, Huan and McIntosh, Avery L and Martin, Gregory G and Petrescu, Anca D and L, undefined and rock, Kerstin K and L, undefined and rock, Danilo and Kier, Ann B and Schroeder, Friedhelm
Journal: PPAR research (2013)
 
Aquaporin-9 protein is the primary route of hepatocyte glycerol uptake for glycerol gluconeogenesis in mice
Authors: Jelen, Sabina and Wacker, Sören and Aponte-Santamaría, Camilo and Skott, Martin and Rojek, Aleks and ra , undefined and Johanson, Urban and Kjellbom, Per and Nielsen, Søren and de Groot, Bert L and Rützler, Michael
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 44319–44325

参考文献

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Fluorescent microplate cell assay to measure uptake and metabolism of glucose in normal human lung fibroblasts
Authors: Leira F, Louzao MC, Vieites JM, Botana LM, Vieytes MR.
Journal: Toxicol In Vitro (2002): 267
 
Glucose-induced alterations of intracellular ionized magnesium in human lymphocytes
Authors: Delva P, Degan M, Pastori C, Faccini G, Lechi A.
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Plasma glycohydrolase levels in patients with type 1 diabetes at onset and in subjects undergoing an intravenous glucose tolerance test
Authors: Goi G, Bairati C, Burlina A, Massaccesi L, Monciotti C, Segalini G, Testa R, Lombardo A.
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High glucose induces enhanced monocyte adhesion to valvular endothelial cells via a mechanism involving ICAM-1, VCAM-1 and CD18
Authors: M, undefined and uteanu I, Voinea M, Serban G, Simionescu M.
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Enalaprilat inhibits hydrogen peroxide production by murine mesangial cells exposed to high glucose concentrations
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Glucose transport, phosphorylation, and utilization in isolated porcine pancreatic islets
Authors: Rabuazzo AM, Davalli AM, Buscema M, Socci C, Caltabiano V, Pontiroli AE, Di Carlo V, Pozza G, Vigneri R, Purrello F.
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Plasma oxidizability in subjects with normal glucose tolerance, impaired glucose tolerance, and NIDDM
Authors: Haffner SM, Agil A, Mykkanen L, Stern MP, Jialal I.
Journal: Diabetes Care (1995): 646
 
The effect of glucose metabolism on murine follicle development and steroidogenesis in vitro
Authors: Bol, undefined and NI, Humpherson PG, Leese HJ, Gosden RG.
Journal: Hum Reprod (1994): 617

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