产品信息｜Certificate of Analysiss

rPNGase F糖苷酶, 质谱级

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HLS PNG001C

50ul

rPNGase F 蛋白酶

说明: 质谱级PNGase F 糖苷酶特异性水解复杂的糖蛋白的寡糖和高甘露糖链接的天冬酰胺，酶切掉天冬氨酸脱氨基的天冬酰胺,保留低聚糖蛋白

完好无损。但是不会去除低聚糖含有α(1→3)核心岩藻糖。

物理形态: 20mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25°C), 50mM NaCl and 5mM EDTA溶液

分子量: 35kDa.

浓度：10unit/ul

储存条件：存储在4-10℃冰箱，禁止-20℃以下低温冷冻

保质期：12月在4℃

pH 范围: PH6.0–10.0 有活性， PH=8.6具有很好活性

适用范围：特异性酶切糖蛋白的 N端寡糖

溶液内酶解SOP:

1.

在 50mM 碳酸氢铵 (pH 7.8)溶液中加入20ug变性的糖蛋白，调整体积至 18µl.

2.

加 2µl rPNGase F溶液

3. 37°C条件下， 保温 1–2 小时酶切糖蛋白样品

活性: 40000unit/min/mg；

单位定义：PNGase F糖苷酶每分钟酶切1.0 umole Ribonuclease B的量，反应条件：37℃，PH=7.5

质量控制｜Quality Control

纯度： 使用Maldi TOF检测杂质蛋白质峰强度，rPNGase F峰峰高比大于99.5%

活性:40000unit/min/mg；单位定义：rPNGase F蛋苷酶每分钟酶切1.0 umole 变性的Ribonuclease B的量，SDS-PAGE分析定量。

Mal

di TOF质谱检测:

变性的RNase B 使

用rPNGase F糖苷酶在37°C酶切60min后，使用

FA基质激光解析质谱分析，可见切糖后的重链蛋白

14.9kDa和轻链蛋白14

.1

kDa质谱峰，未见杂质蛋白信号

,糖蛋白的糖切除完全。

LC-MS/MS 质谱分析: 变性的RNase B经过PNGase F去糖处理,蛋白又使用Trypsin酶切成肽段，质谱鉴定到理论肽段9条，覆盖率67%。