T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q–NEB

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T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q                              收藏

T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q--NEB T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q--NEB T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q--NEB

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通用 miRNA 克隆接头

 
 

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上,用于链特异性 cDNA 文库构建 

概述

 
 

T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQT4 Rnl2tr KQ能特异性将 末端预腺苷化的 DNA RNA 连接到RNA 3´ OH 末端。反应无需 ATP,但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。

因为不再使用 ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。

 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 MBP 融合表达的质粒,该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 位置进行了突变,精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。
 
 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。 

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
 

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中, 25℃ 条件下, 1 小时能将 80% 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头(NEB#S1315] 所需的酶量。单位活性检测条件请登www.neb-china.com www.neb.com
 

浓度

200,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。